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中的个进行初步分析发现和在甲状腺乳头状癌中显着过度表达但或则不然。在一系列个正常甲状腺个增生结节个滤泡性腺瘤个经典乳头状甲状腺癌个滤泡变异型甲状腺乳头状癌个滤泡性癌和个具有乳头状癌部分核特征的包膜滤泡病变中检查了前三种的表达。结果显示在经典乳头状癌和滤泡性变体中最一致地过表达而所有其他组均表现出相似水平的较低表达对于乳头状癌和所有其他组之间的成对比较。

具有部分乳头状癌特征的滤泡性病变均表现出与其

他非乳头状癌组相似的低水平表明它们在生物学上与乳头状癌不同。和在乳头状癌中也表现出较高的表达乌拉圭手机号码但与其他组有很大的重叠。当应用于各种病变的个样本时只有和持续作为乳头状癌的区分标记物。我们得出的结论是特别是可能成为和手术病理标本中诊断甲状腺乳头状癌的辅助标记。

微小甲状腺乳头状癌癌症分子诊断主要的是最近才

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被发现的一类小。年首次在秀丽隐杆线虫中描述随后于年发现在各种植物和动物物种中保守。与不同的大阿联酋电话号码列表小只有个核苷酸并且不编码氨基酸序列。与转录本的巨大多样性相比种类的数量要少得多迄今为止报道了种人类年月桑格研究所。尽管复杂性有限但已被证明具有深远的生物学重要性在转录后水平负向调节基因表达。

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因此我们研究了上调最显着的的

预测靶点。我们使用了最常用的算法和来预测人类基因靶点。版和将确定为中的的假定靶点而将确定为的靶点。此外还证明和确实能够下调蛋白的水平。我们通过蛋白质印迹和免疫组织化学获得的初步数据似乎表明中的蛋白水平急剧降低证实了我们小组几年前发表的数据等人。在这项工作正在进行的同时一篇关于中表达谱的论文已经发表。

我们的结果不仅证实了这些已发表的数据而且

还增加了有关这些在实验甲状腺细胞和动物系统中过度表达的更多信息更重要的是表明在人类甲状腺癌细胞增乌克兰手机号码殖中的作用因此可能在甲状腺癌发生过程中发挥作用。另一方面我们的论文还通过定量揭示了在中的过度表达这是以前从未描述过的。总之这项研究表明了与相关的特征并表明过度表达在甲状腺癌发生中发挥着关键作用。

抽象的微阵列分析一致发现甲状腺肿瘤中的表达

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发生改变表明它们在甲状腺癌发生中的作用。为了探讨这种差异表达是否可以用作外科病理学和细针抽吸标本的诊断工具使用来自个福尔马林固定石蜡包埋组织和个离体抽吸标本的总通过定量评估了选定的表达。发现所有石蜡包埋组织和除一份样本外的所有均可分析石蜡切土耳其电话号码列表片可产生更好的质量。

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就中过度表达的机制而言我们可以排除

也发生同样的情况。基因扩增发挥主要作用的可能性。甲状腺癌发生过程中可能有其他机制导致上调。值得注意的是和在良性和分化良好的中并未过度表达。这些结果表明测量这些水平可用于良性和恶性甲状腺肿瘤的鉴别诊断。需要对大量样本进行分析以确定表达评估作为诊断甲状腺肿瘤的有效工具。

我们工作的目的之一是研究过度表达在甲状腺癌

发生中的可能作用。为了回答这个问题我们采用了两种实验方法。我们对用过表达的载体转染的人甲状腺癌细胞系进行了英国手机号码集落测定发现过表达的细胞中集落的数量明显更高。另一种方法基于通过反义寡核苷酸阻断功能观察到细胞生长显着减少。因此这两个实验都指出了在甲状腺癌细胞生长中的作用。

在甲状腺特异性启动子例如基因的转录控制下过表达

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的转基因小鼠的产生应该对这个问题给出明确的答案。我们的实验室也在进行旨在验证突尼斯电话号码列表过度表达在甲状腺细胞生长中的作用的实验。已知可以调节参与控制发育增殖细胞凋亡和应激反应的基因的表达,。在动物细胞中单链通过主要在,中的部分互补性与特定靶标结合。结合的要么保持不翻译导致相应蛋白质产物减少要么被干扰效应复合物降解导致转录本数量减少。

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我们确实发现了大约种显着失调其

中至少有种的表达高度上调。这些结果毫无疑问表明的异常表达在人类甲状腺癌中很常见。然而还需要更多的实验来最终证明上调在人类甲状腺癌发生中发挥作用。有趣的是我们发现样本中的显着上调而没有发现下调的倍数变化高于两倍。因此这表明涉及特定的功能获得而非功能丧失。有趣的是关于未分化甲状腺癌的初步数据未显示显示了相反的结果只有少数上调变化倍数非常低而一些则大幅下调。

在中可能充当肿瘤抑制基因或分化基因

这种情况与甲状腺癌发生过程中的其他遗乌干达手机号码传病变有一些相似之处中癌基因如的激活以及中抑癌基因的功能丧失。和诱导是的一个恒定特征。因此它们的上调代表了的真正特征。事实上它们的上调已通过和定量对大量样本进行了验证并且与一样过度表达可能会增加高达倍。值得注意的是我们系统中的和前体和成熟产物表现出非常高的相似表达模式。

这与和聚集在染色体上的观察结果一致与其他一些聚

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集的基因一样序列具有高度相似性并且也许它们可能被转录为多顺反子,。我泰国电话号码列表们的体内和体外研究证实了它们在甲状腺细胞转化过程中的上调。事实上在正常大鼠甲状腺细胞系和小鼠正常甲状腺组织中完全不存在表达而在相应的转化细胞和和小鼠中发育的中可以清楚地检测到表达。

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印迹分析证实了转染细胞中

的过度表达数据未显示。阻断表达可抑制甲状腺癌细胞生长为了研究过表达在甲状腺肿瘤细胞生长中的作用我们通过用修饰的反义寡核苷酸转染细胞来阻断功能。如图所示在用反义寡核苷酸,处理的细胞中没有检测到而在用对照寡核苷酸,处理的细胞中则存在。寡核苷酸转染后小时和小时观察到与对照细胞相比用反义寡核苷酸处理的细胞数量显着减少图。

这些结果表明过表达在甲状腺癌细胞增

殖中具有重要作用。讨论介导一种最近公认的翻译抑制形式可改变关键蛋白质的水平从而为多种植物和动物的土耳其手机号码发育和稳态事件的时空控制提供机制。由于异常增殖和或细胞凋亡是人类癌症的标志因此表达模式似乎可能表明恶性状态。事实上在某些肿瘤类型中已经发现了一些的表达改变最近的研究表明特定基因的表达改变有助于癌症的发生和进展等人年年卡林等人。

年等人。麦克马纳斯迈克尔等人。梅茨勒等人

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年高见泽等人。年艾斯等人。和等人。约翰逊等人。。因此表达谱有可能为癌症分类诊断和预后提供信台湾电话号码列表息。甲状腺肿瘤代表了研究细胞转化过程的优秀模型因为它们包括显示不同程度恶性程度的广泛组织型。在我们的研究中我们通过微阵列分析了个和个正常甲状腺样本以鉴定在癌症中表达显着失调的。

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与正常甲状腺细胞相比在分析的

八个癌症样本中有七个检测到这三种的表达要高得多图。和在实验性大鼠和小鼠甲状腺癌模型中的过度表达大鼠甲状腺分化的滤泡细胞细胞先前已用多种病毒和细胞癌基因进行转化。其中一些如和对应于人类中经常激活的癌基因。通过对其前体细胞进行定量分析这些细胞系和的表达。图显示和前体在正常细胞中检测不到而在和转化的细胞中大量表达。

在细胞系中表达特别高印迹如图所示基本

证实了定量获得的结果。当评估表达时获得了类突尼斯手机号码似的结果数据未显示。在表达酪氨酸激酶受体甲状腺球蛋白等人等人和等人的转基因动物系中发育的在启动子转录控制下也进行了分析。通过定量分析和前体表达。如图所示在甲状腺癌样本中观察到特异性和前体水平升高而它们在正常小鼠甲状腺组织中表达水平较低。

也获得了类似的结果数据未显示因此和在

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甲状腺癌发生的实验模型中也过度表达。过表达影响甲状腺癌细胞系的生长中和的异常表达促使我们研究它们的过度表达是否可能是甲状腺细胞增殖的致病事件。为此我们选择进行功能研究首先对人类细胞系进行集落形成测定。如图所示与用空载体转染的相同细胞相比用转染瑞士电话号码列表产生了更高数量两倍的集落。

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为了证实这些结果我们使用

对应于和的探针对有限数量的样本进行了分析图。印迹证实了微阵列分析获得的结果并且在许多情况下正常甲状腺样本和肿瘤性甲状腺样本之间的表达差异甚至比微阵列筛选预期的结果还要强。事实上如图所示和在所有八个检查的中大量表达而它们的表达在正常甲状腺组织中仅检测到微弱。对源自人的四种细胞系的印迹分析也显示与正常甲状腺组织相比表达更高图。

接下来我们使用定量评估了个甲状腺

滤泡腺瘤和个中和前体的表达这与微阵列分析的结果不同。图显示和前体在几乎所有癌症样本中过度泰国手机号码表达其中一些非常高倍数变化高达倍平均倍；倍数变化高达倍平均倍；倍数变化高达倍平均倍。。这些结果证实和表达水平的增加代表了人类的特征。有趣的是在分析的样本中没有观察到和前体过度表达。

相比之下如图所示在这些样本中还检测

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到前体表达适度增加倍数变化高达平均为。甲状腺中表达分析在材料含量太低而无法进行瑞典电话号码列表免疫组织化学检测的情况下可能是术前诊断甲状腺肿瘤的有用工具。为了评估和基因表达分析对样本的适用性我们研究了例。用作对照的正常甲状腺细胞是从携带非肿瘤结节的甲状腺的中获得的。通过对其前体进行定量分析细胞学标本的和表达。

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转染测定,寡核苷酸和,增强型

绿色荧光蛋白作为对照用于反义实验。所有,甲基寡核苷酸均由,如前所述等人合成并以浓度使用。细胞以每孔×个细胞铺在六孔板中每个条件有个重复孔根据制造商的方案用奥斯汀德克萨斯州美国转染并在转染后和小时通过,计数。质粒构建和细胞集落形成测定通过以有义方向克隆中包含的基因组序列来构建表达质粒哺乳动物表达载体西雅图华盛顿州美国的克隆位点。

使用的引物如下正向,。如所述通过印迹评

估的表达并且使用水平的蛋白质印迹来显示和构建体的转染效率相同。细胞以的密度接种在培养皿中并用μ或转染。小时后添加抗生素遗传霉素；。药物选择开始两周后固定细台湾手机号码胞并用结晶紫结晶紫溶于甲醇染色。结果与正常甲状腺的表达谱我们使用微阵列来评估个和个正常甲状腺组织的表达谱。

正常甲状腺样本均与其相应的癌样本相匹配

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通过应用方差分析我们获得了正常甲状腺和肿瘤甲状腺之间差异表达的列表表。在某塞内加尔电话号码列表些情况下观察到相应前体水平的改变数据未显示。与正常组织相比肿瘤组织中有种过表达其倍数变化等于或高于它们是和。相比之下所分析的在肿瘤样本中的表达均未显示出两倍以上的减少。然后我们决定集中研究其中三个进行进一步研究因为它们表现出最高的倍数变化。

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在°下用×标准磷酸盐水磷酸盐盐水磷

酸钠；和清洗膜两次并用×清洗两次。用作探针的寡核苷酸与成熟的序列互补如下。探针,；探针,。使用与,互补的寡核苷酸来标准化表达水平。使用多核苷酸激酶巴塞尔瑞士对总共的每个探针用γ进行末端标记。在重新杂交之前通过在中煮沸分钟来剥离印迹并成功地重新探测最多次。前体的定量按照等人的描述进行定量。

简而言之使用基因特异性引物和将逆转录为并使用方程

−Δ将每个的相对量标准化为其中Δ,。使用和,进行三次如下°分钟和个循环°秒和°分钟。每次后运行解离曲线以验证扩增特异性。分析的包括和以及前体。使用的引物如下。人正向,人反向,瑞士手机号码；人正向,；大鼠正向,大鼠反向,；小鼠正向,小鼠反向,。最后人大鼠和小鼠的引物为,用于正向和,用于反向。

细胞培养人甲状腺癌细胞系和在含有胎牛血清

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的改良培养基,中生长谷氨酰胺和氨苄青霉素链霉素在气氛中。细胞系源自大鼠甲状腺等人在补充有小牛塞内加尔电话号码列表血清和六种生长因子促甲状腺激素氢化可的松胰岛素转铁蛋白生长抑素和甘氨酰组氨酰赖氨酸圣路易斯密苏里州美国的改良培养基中培养。感染多种癌基因和在与相同的培养基中培养但缺乏六种生长因子。

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对个正常甲状腺样本和个患者样

本的进行了表达评估。细针穿刺活检在那不勒斯进行如其他地方所述等人等人。样本取自名甲状腺肿瘤患者这些患者随后接受了手术因为检查得出了可疑癌症的细胞学诊断结果。用作对照的正常甲状腺细胞是从携带非肿瘤结节的甲状腺的中获得的。样品用×洗涤两次然后按照与下述相同的程序进行提取。

提取根据制造商的说明使用卡尔斯巴德加利福尼

亚州美国进行总分离。在干冰上冷却的不锈钢研钵和研杵中粉碎肿瘤后从新鲜标本中提取。通过变性瑞典手机号码琼脂糖凝胶电泳评估的完整性。芯片微阵列微阵列实验程序如前所述进行。简而言之在逆转录过程中使用随机检查者对来自每个样品的μ总的标记靶标进行生物素标记。杂交在微阵列芯片版本上进行包含个探针一式三份对应个人类和小鼠基因。

使用,通过链霉亲和素缀合物的生物素结合来检测杂交

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信号。扫描仪图像通过软件进行量化。原始数据通过软件版进行标准化和分析。使用标准化选项将沙特阿拉伯电话号码列表表达数据以中值为中心。使用工具进行统计比较。印迹分析这是按照先前描述的方式进行的等人。样品每个μ在丙烯酰胺尿素预制凝胶,上进行电泳并转移到膜,上。杂交在°中进行小时。

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此外由于含有与所有已知人类

相对应的序列的微阵列的开发最近分析全基因组表达已成为可能等人年等人。梁等人。。因此这些微阵列可以识别正常样品和肿瘤样品之间差异表达的。甲状腺肿瘤是研究上皮细胞多步癌变过程的良好模型因为它们包含多种不同程度恶性的病变从非侵袭性且分化良好的良性腺瘤到侵袭性很强且总是致命的未分化的未分化甲状腺癌。

乳头状癌和滤泡状癌是甲状腺癌最常见的形式代

表肿瘤形成的中间形式斯里兰卡手机号码正在分化并具有良好的预后。在这项研究中我们使用含有对应于个人类前体和成熟的寡核苷酸探针的微阵列微阵列；参见材料和方法分析了个人类乳头状甲状腺癌样本与个正常甲状腺组织样本的全基因组表达谱。发现的一个子集在样本中过度表达。特别是和在大多数分析的中以及在来自受影响的患者的细针抽吸活检中过度表达。

通过反义方法阻断功能导致人细胞系的细胞生长

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减少而其过度表达导致集落形成增加表明过度表达在甲状腺癌发生中发挥关键作用。材料和方法甲状俄罗斯电话号码列表腺组织样本从手术标本中获得人甲状腺肿瘤组织和正常邻近组织或对照正常甲状腺叶并立即冷冻在液氮中。甲状腺肿瘤采集于法国皮埃尔贝尼特里昂南中心医院的解剖病理服务中心。

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总之这些数据综合起来表明了与

相关的特征并表明失调是甲状腺细胞转化中的一个重要事件。通过阻断功能和在人衍生细胞系中过度表达进行的研究表明过度表达在甲状腺癌发生中发挥着关键作用。总之这些数据综合起来表明了与相关的特征并表明失调是甲状腺细胞转化中的一个重要事件。通过阻断功能和在人衍生细胞系中过度表达进行的研究表明过度表达在甲状腺癌发生中发挥着关键作用。

总之这些数据综合起来表明了与

相关的特征并表明失调是甲状腺细胞转化中的一个重要事西班牙手机号码件。介绍代表一类从较大发夹前体裂解而来的内源性小型非编码但有功能的。它们包含多细胞生物中最丰富的基因调控分子类别之一并可能影响许多蛋白质编码基因的输出。事实上它们能够结合靶的,非翻译区并导致翻译受阻或降解等人等人。

当它们位于编码区甚至,中时也能

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发挥作用皮莱。表达模式在发育过程中受到调节并且通常具有组织特异性。然而人们对它们在哺乳动物罗马尼亚电话号码列表中可能的功能知之甚少。目前有一些报道表明也代表了一类参与人类肿瘤发生的基因在癌症中异常表达缺失扩增或突变,。年等人年和年等人。。某些的表达失调与人类增殖性疾病有关例如细胞慢性淋巴细胞白血病乳腺癌和结直肠肿瘤表明它们可能发挥癌基因或肿瘤抑制因子的作用。